Спермограмма и методы исследования сперматозоидов. Лекция для врачей
Лекция для врачей "Спермограмма и методы исследования сперматозоидов" (отрывок из книги "Интерпретация спермограммы. Структура и функция сперматозоидов в норме и при нарушении фертильности" - Брагина Е. Е.)
Спермограмма и методы исследования сперматозоидов
Тесты по исследованию эякулята и его компонентов делятся на три категории.
1. Стандартные тесты, которые обязана проводить каждая лаборатория, выполняющая спермиологическое исследование. Это существенные элементы оценки качества спермы (макропараметры, количество сперматозоидов, подвижность, жизнеспособность, морфология, агрегация и агглютинация, содержание лейкоцитов и незрелых половых клеток).
2. Тесты для расширенного исследования, которые проводятся по выбору лаборатории или по запросу врача. Их результаты не входят в стандартную спермограмму, но имеют клиническое значение в некоторых ситуациях: индекс множественных дефектов сперматозоидов и индекс тератозооспермии, оценка фрагментации ДНК сперматозоидов с помощью различных тестов (TUNEL, COMET и др.), генетические тесты (оценка анеуплоидии), иммунохимические методы оценки лейкоцитов и лимфоцитов, биохимический анализ. Оценку антител, покрывающих сперматозоиды, которая, согласно 5-му изданию руководства ВОЗ [WHO, 2010], относилась к стандартным тестам, предложено не проводить как обязательную процедуру. Тесты для оценки взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью были исключены из нового издания в связи с тем, что они практически не используются в клинической практике.
3. Исследовательские тесты (оценка свободных радикалов спермы, акросомная реакция, оценка хроматина сперматозоидов, электрофизиологические методы исследования сперматозоидов, компьютерный анализ). Некоторые исследовательские тесты, предлагаемые научными публикациями за последние 10 лет (так называемые омики — эпигеномика, транскриптомика и др.; тесты, определяющие компоненты, ответственные за фертилизационные свойства сперматозоидов — фактор активации ооцитов, центриоль), не вошли в руководство ВОЗ 2021 г.
Получение материала для исследования
Время воздержания
Время воздержания — важный параметр, на который незаслуженно обращают мало внимания при исследовании спермы, и его можно использовать как терапевтическое средство (табл. 1.1). Уменьшение времени воздержания при нормозооспермии может применяться в случаях повышенного содержания сперматозоидов с фрагментацией ДНК: при половом воздержании 1 день уменьшается количество сперматозоидов с фрагментацией ДНК [Agarwal et al., 2016] и сперматозоидов с повреждениями акросомы [Levitas et al., 2006]. Этот прием можно использовать при получении сперматозоидов в центрах ВРТ, но следует иметь в виду, что такие сперматозоиды следует использовать сразу после эякуляции и разжижения, без их инкубации. В сперматозоидах, полученных после короткого времени воздержания от пациентов с нормозооспермией, значимо возрастает фрагментация ДНК после инкубации in vitro [Bahadur et al., 2016]. Эти данные имеют значение для центров репродукции как один из методов преодоления повышенного содержания сперматозоидов с фрагментацией ДНК.
У пациентов с олигозооспермией уменьшение времени полового воздержания приводит к улучшению характеристик эякулята: повышению концентрации, подвижности и содержания сперматозоидов нормальной морфологии [Bahadur et al., 2016]. Максимальное количество беременностей достигается после внутриматочной инсеминации, если период воздержания до сбора эякулята составлял менее 2 дней (30-36 ч) [Marshburn et al., 2010].
При некрозооспермии можно провести исследования спермограммы после 2 и 5 дней воздержания. Разница в содержании мертвых сперматозоидов свидетельствует о нарушении функции эпидидимиса.
При неудовлетворительных результатах анализа для первичной оценки эякулята рекомендуется проводить два исследования. В тех случаях, когда неудовлетворительные результаты могут быть следствием неправильного забора материала (например, снижение подвижности сперматозоидов за счет плохо вымытой посуды для сбора эякулята, увеличение периода между эякуляцией и исследованием более 2 ч, уменьшенное количество сперматозоидов или снижение объема при потере части исследуемого эякулята, что обычно выясняется при опросе пациента), повторное исследование можно провести с интервалом 7 дней. Если же сбор материала был осуществлен правильно, оптимально проводить повторное исследование через 1-2 мес.
Таблица 1.1. Время полового воздержания
Методы получения эякулята
При стандартном спермиологическом исследовании рекомендуется получать эякулят путем мастурбации (табл. 1.2). Не рекомендуется использовать обычные кондомы, т. к. их внутренняя поверхность обычно обработана спермицидными веществами. В лабораторном помещении для сбора эякулята должны соблюдаться санитарные нормы: поверхности должны быть моющимися, следует обеспечить возможность ультрафиолетовой обработки. В комнате для сбора эякулята должны быть вода, мыло, одноразовые полотенца или салфетки.
Для сбора эякулята следует использовать широкогорлые контейнеры из нетоксичного пластика. Если предполагается проводить микробиологический анализ эякулята, необходимо использовать стерильные контейнеры.
В тех случаях, когда невозможно прибегнуть к мастурбации, можно использовать специальные пластиковые кондомы. Применение прерванного полового акта нежелательно, т. к. первая порция эякулята, в которой концентрация сперматозоидов обычно максимальная, может быть потеряна. Кроме того, при прерванном половом акте в образце могут оказаться клеточные или бактериальные примеси из влагалища, а кислая реакция влагалища способна оказать отрицательное действие на подвижность сперматозоидов.
Таблица 1.2. Методы получения эякулята для исследования
Сбор материала путем мастурбации позволяет стандартизировать результаты спермограммы. Было показано, что дискомфорт при получении эякулята не отражается на качестве сперматозоидов [Pottinger et al., 2015].
Если провести забор материала на месте исследования невозможно, пациент получает сосуд для сбора эякулята и доставляет его из дома в течение 2 ч (оптимально в течение 30 мин). При доставке следует сохранять температуру эякулята, близкую к температуре тела, что достигается, если поместить сосуд с эякулятом в нагрудный или брючный карман. Следует учесть, что если при первом анализе эякулята была выявлена сниженная подвижность сперматозоидов (< 25 % активной прогрессивной подвижности), срок между получением и исследованием эякулята следует свести к минимальному, т. к. подвижность сперматозоидов со временем снижается. В бланке анализа должно быть отмечено время, которое прошло между получением эякулята и исследованием.
Электроэякуляция и пенильная вибростимуляция показаны при ряде заболеваний.
Сбор эякулята
Эякулят состоит из семенной жидкости и сперматозоидов. Основные компоненты семенной жидкости — секрет семенных пузырьков (1,5-5,0 мл, примерно 2/3 объема) и жидкость предстательной железы (0,2-1,0 мл, 1/3 объема), небольшой объем дают добавочные железы. Собственно сперматозоиды находятся в 0,2 мл жидкости из семявыносящего протока, эпидидимиса и семенных канальцев. Эти жидкости не смешиваются до эякуляции.
Большая часть сперматозоидов находится в первой фракции эякулята с секретом предстательной железы, последняя фракция содержит главным образом жидкость семенных пузырьков и небольшое количество сперматозоидов. В результатах спермограммы должно быть отмечено, полностью ли собран эякулят и какая часть эякулята не попала в контейнер для сбора материала. В противном случае есть вероятность ошибочного определения количества сперматозоидов. Потеря первой фракции эякулята имеет большее значение для результата анализа, чем потеря последней фракции.
Макроскопическая оценка эякулята
К макроскопическим параметрам эякулята относятся время разжижения, цвет, запах, объем, pH, вязкость.
Разжижение
Сразу после эякуляции сперма здоровых фертильных мужчин коагулирует, превращаясь в желеобразную массу, которая разжижается после попадания во влагалище (табл. 1.3). Эякулят может содержать желеобразные гранулы (желатиновые тельца), которые не подвергаются разжижению. Эти гранулы не имеют клинического значения. Кроме того, эякулят может содержать тяжи слизи, которые не разжижаются и могут искажать показатели спермограммы. Их наличие должно быть отмечено в протоколе исследования.
Физиологическое значение процесса разжижения изучено недостаточно. Возможно, что коагуляция препятствует потере сперматозоидов во влагалище, а последующее разжижение обеспечивает их подвижность при прохождении через шейку матки.
Цвет
Визуальную оценку образца проводят либо сразу после разжижения, либо через час после эякуляции (табл. 1.4) [WHO, 2010].
Таблица 1.4. Лабораторные показатели цвета эякулята
Таблица 1.3. Лабораторные показатели разжижения эякулята
Книга "Интерпретация спермограммы. Структура и функция сперматозоидов в норме и при нарушении фертильности"
Автор: Брагина Е. Е.
В книге обобщен опыт многолетних исследований структуры и функции сперматозоидов фертильных мужчин и пациентов с различными типами бесплодия, в т. ч. при невынашивании беременности, что традиционно считается прерогативой гинекологов. Приводятся принципы интерпретации данных лабораторной спермограммы согласно рекомендациям 6-го издания руководства ВОЗ по исследованию спермы человека. Первые главы посвящены общим вопросам сперматогенеза и методам исследования сперматозоидов. Описаны морфология отдельных частей этих клеток и их аномалии. Последние главы включают сведения о внутригаметном вирусном инфицировании сперматозоидов и бактериальном инфицировании эякулята. Приводятся данные об особенностях электронно-микроскопического исследования сперматозоидов для оценки их фертилизационного потенциала.
Для урологов, андрологов, акушеров-гинекологов и эмбриологов, работающих в сфере репродуктивной медицины и занимающихся проблемами бесплодия.
Содержание книги "Интерпретация спермограммы. Структура и функция сперматозоидов в норме и при нарушении фертильности" - Брагина Е. Е.
1. Спермограмма и методы исследования сперматозоидов
2. Общие понятия о сперматогенезе
3. Головка сперматозоида. Хроматин, ядерная оболочка
4. Аномальная морфология ядра сперматозоида, ядерные вакуоли
5. Головка сперматозоида. Структура и функции акросомы и перинуклеарной теки
6. Аномалии акросомы и перинуклеарной теки
7. Соединительный участок жгутика сперматозоида, центриоль. Аномалии соединительного участка
8. Жгутик сперматозоида
9. Нарушение подвижности сперматозоидов и аномалии структуры жгутика
10. Внутригаметное вирусное инфицирование сперматозоидов
11. Бактериальное инфицирование эякулята
12. Нейтрофильные лейкоциты, спермиофаги и незрелые половые клетки эякулята
0 комментариев